Интрон а раствор для ин 18 млн ме/1,2 мл 1 шприц-ручка в Оренбурге заказать по цене 6555 руб в аптеке онлайн

Показание к применению:

Хронический гепатит В:

-лечение взрослых и детей (от 1 года) с подтвержденной репликацией вируса гепатита В (наличие ДНК HBV или HBeAg в сыворотке крови) в сочетании с повышением активности АЛТ в плазме крови и гистологически подтвержденным активным воспалительным процессом и/или фиброзом печени.

Хронический гепатит С:

монотерапия или в комбинации с рибавирином у взрослых, у которых повышена активность трансаминаз, отсутствуют признаки декомпенсации функции печени и определяется РНК HCV или антитела к вирусу гепатита С (anti-HCV) в сыворотке крови;
у детей в возрасте 3 лет и старше с компенсированнымм заболеванием печени, ранее не получавших лечение итерфероном альфа-2b, и у взрослых с рецидивом после терапии итерфероном альфа-2b предпочтительно назначать Интрон А в комбинации с рибавирином.

Перед началом комбинированной терапии следует ознакомиться с инструкцией по применению рибавирина.

Папилломатоз гортани:

лечение взрослых и детей от 1 года.

Волосатоклеточный лейкоз:

лечение взрослых в виде монотерапии или в комбинации с рибавирином.

Хронический миелолейкоз:

монотерапия: лечение взрослых при наличии филадельфийской хромосомы (Ph+) или транслокации bcr/abl (клинические данные показывают, что гематологическая ремиссия и большой/малый цитогенетический ответ достигаются у большинства пациентов, при этом большой цитогенетический ответ определяют как количество Рh+-лейкозных клеток в костном мозге <34%, а малый — от 34% до 90%;
комбинированная терапия: назначение Интрона А в сочетании с цитарабином во время первых 12 месяцев лечения позволяет существенно увеличить число больших цитогенетических ответов и значительно увеличить общую выживаемость пациентов по сравнению с монотерапией интерфероном альфа-2b после 3 лет лечения).

Тромбоцитоз у пациентов с хроническим миелолейкозом (ХМЛ):

тромбоцитоз часто возникает при хроническом миелолейкозе (Интрон А применяли с некоторым эффектом у взрослых больных с тромбоцитозом, связанным с ХМЛ).

Множественная миелома:

качестве поддерживающей терапии у взрослых пациентов, достигших частичного ответа (уменьшение уровня парапротеина в сыворотке крови на 50%) после начальной индукционной терапии (поддерживающая терапия удлиняет фазу плато, однако влияние препарата на общую выживаемость окончательно не установлено).

Фолликулярная лимфома (неходжкинская лимфома):

лечение фолликулярной лимфомы с высокой опухолевой массой — в сочетании с адекватной индукционной химиотерапией (например, СНОР-режимом) у взрослых. К данной группе относятся фолликулярные лимфомы при наличии хотя бы одного из перечисленных признаков: большой размер опухоли (>7 см), вовлечение 3 или более лимфатических узлов (каждый >3 см), общие симптомы (снижение массы тела более чем на 10%, повышение температуры тела более 38°С в течение более чем 8 дней, повышенное потоотделение по ночам), спленомегалия (граница селезенки выходит за область пупка), сдавление важных органов или возникновение компрессионного синдрома, вовлечение эпидурального пространства или орбитальной области, лейкемия, значительный выпот.

Эффективность терапии препаратом Интрон А у пациентов с фолликулярными неходжкинскими лимфомами низкой степени злокачественности и низкой опухолевой нагрузкой не была установлена.

Саркома Капоши на фоне СПИД:

лечение больных при отсутствии оппортунистических инфекций, если число клеток CD4 превышает 250/мм3.

Рак почки:

прогрессирующий рак почки у взрослых.

Карциноидные опухоли:

карциноидные опухоли у взрослых при вовлечении лимфоузлов или с метастазами в печени и с карциноидным синдромом.

Злокачественная меланома:

адъювантная терапия у взрослых больных, после хирургического лечения по поводу первичной опухоли, при наличии высокого риска системного рецидива.

Интрон-А инструкция по применению

ИНСТРУКЦИЯ по применению препарата Интрон-А

Фармакологическое действиеИнтрон-А содержит активный компонент рекомбинантный интерферон альфа-2b. Эндогенные и экзогенные интерфероны оказывают характерное влияние на клетки вследствие связывания со специфическими рецепторами, расположенными на мембранах. После связывания с рецептором клеточной мембраны интерферон индуцирует сложную последовательность реакций внутри клеток (в частности, стимулирует определенные ферментные системы). Частично именно данные процессы определяют клеточные эффекты интерферонов, в том числе, такие как подавление репликации вирусов внутри индуктированных клеток, угнетение пролиферации клеток. Кроме того, данный механизм действия обеспечивает иммуномодулирующий эффект интерферона, который включает нарастание специфической цитотоксической активности лимфоцитов в отношении клеток-мишеней и повышение фагоцитарной активности макрофагов. Рекомбинантный интерферон альфа-2b обладает антипролиферативным действием относительно культур клеток животных и человека, а также ксенотрансплантатов опухолей животных и человека. In vitro интерферон рекомбинантный альфа-2b проявляет значительную иммуномодулирующую активность. Подавление репликации вирусов под действием препарата Интрон-А отмечается, как in vitro, так и in vivo. Точный механизм противовирусного действия препарата Интрон-А до конца не ясен, однако установлено, что препарат нарушает метаболизм клеток, пораженных вирусом, что приводит к нарушению репликации вируса и повреждению генома вириона (вследствие чего уже сформированные вирионы не могут покинуть пораженную клетку). У пациентов, страдающих хроническим гепатитом В, во время терапии рекомбинантным интерфероном альфа-2b на протяжении 60-120 дней отмечается элиминация ДНК вируса гепатита В (ДНК HVB) и улучшение гистологии печени. У пациентов, страдающих хроническим гепатитом С (которые ранее не получали интерфероны и у которых хронический гепатит С был подтвержден продолжительной ПЦР-реакцией на РНК вируса гепатита С, биопсией печени и другими исследованиями), при применении препарата Интрон-А (сочетано с рибавирином или в виде монотерапии) в большинстве случаев был достигнут устойчивый вирусологический ответ. Комплексная терапия препаратом Интрон-А и рибавирином показала лучшие результаты, чем монотерапия интерферонами. В лечении рецидивов удавалось добиться элиминации РНК HVC из плазмы, уменьшения интенсивности воспаления печени и нормализации АЛТ. Данные результаты сохранялись в течение минимум 6 месяцев после завершения курса терапии препаратом Интрон-А. При подкожном введении биодоступность препарата Интрон-А достигает 100%. После внутримышечного и подкожного введения пик плазменной концентрации интерферона рекомбинантного альфа-2b отмечался спустя 3-12 часов. Период полувыведения после введения подкожно и внутримышечно составлял порядка 2-3 часов. Спустя 16-24 часа после инъекции интерферон в плазме не определялся. После введения препарата Интрон-А внутривенно (в форме инфузии в течение 30 минут) пик плазменной концентрации отмечался в конце инфузии. После внутривенного введения уровень интерферона в плазме снижается быстрее, чем при внутримышечном или подкожном введении (активный компонент препарата Интрон-А не определялся в плазме спустя 4 часа после окончания инфузии, средний период полувыведения составлял порядка 2 часов). Уровень интерферона в моче ниже определяемой величины вне зависимости от способа введения. В ходе клинических исследований препарата Интрон-А у пациентов выявляли интерферон-нейтрализующие антитела (с частотой около 2,9% у пациентов с онкологическими заболеваниями и около 6,2% у пациентов, страдающих хроническими гепатитами). При этом снижения эффективности отмечено не было, а титры антител были достаточно низкими. Введение интерферона рекомбинантного альфа-2b у мышей, кроликов и крыс в течение 3 месяцев не вызывало развития токсичности. У обезьян введение дозы 20*106 МЕ/кг/сутки не приводило к развитию токсических эффектов (при трехмесячном курсе применения), однако увеличение дозы до 100*106 МЕ/кг/сутки сопровождалось развитием токсичности (в частности у нечеловекообразных приматов отмечалось развитие нарушений менструального цикла). У крыс и кроликов интерферон рекомбинантный альфа-2b не вызывает развития тератогенного эффекта, нежелательного влияния на течение беременности, а также нарушений репродуктивной функции у потомства. Исследования на макаках-резусах показало, что увеличение дозы (в 90 и 180 раз выше рекомендуемой) интерферона рекомбинантного альфа-2b приводит к самопроизвольным абортам. Интрон-А не оказывает мутагенного действия.

Показания к применениюПрепарат Интрон-А применяют в виде монотерапии или в сочетании с другими препаратами для лечения пациентов, страдающих хроническими гепатитами, в том числе: — Взрослых и детей от 1 года с хроническим гепатитом В, который подтвержден наличием ДНК HBV или HBeAg в плазме крови, а также сопровождается активным воспалением и/или фиброзом печени (гистологически подтвержденным) и повышением активности АЛТ. — Взрослых с хроническим гепатитом С при повышенной активности трансаминаз, без признаком декомпенсации функции печени, а также подтвержденным наличием РНК HVC или anti-HVC (антител к вирусу гепатита С) в плазме крови. — Детей старше 3 лет с хроническим гепатитом С с компенсированными заболеваниями печени, которые ранее не получали терапию интерфероном рекомбинантным альфа-2b. — Взрослых с хроническим гепатитом С при рецидиве после терапии интерфероном рекомбинантным альфа-2b (рекомендуется только назначение комплексной терапии интерфероном и рибавирином). Интрон-А также назначают в виде монотерапии или в комплексном лечении пациентам с папилломатозом гортани, волосатоклеточным лейкозом и прогрессирующим раком почки, а также карциноидными опухолями при вовлечении лимфоузлов или при наличии метастазов в печени и «карциноидного синдрома». Интрон-А назначают пациентам со злокачественной меланомой в качестве адъювантной терапии после перенесенной операции по поводу первичной опухоли и при высоком риске системного рецидива. Препарат Интрон-А применяют у пациентов с хроническим миелолейкозом: — В качестве монотерапии у взрослых при наличии транслокации bcr/abl или филадельфийской хромосомы. — В комплексе с другими препаратами (например, цитарабином) в течение первых 12 месяцев терапии (с целью повышения числа больших цитогенетических ответов и увеличения общей выживаемости). Интрон-А показан пациентам с тромбоцитозом на фоне хронического миелолейкоза. Препарат Интрон-А может быть назначен в качестве поддерживающей терапии взрослым с множественной миеломой, у которых был получен частичный ответ (снижение уровня парапротеина в сыворотке до 50%) после начальной индукционной терапии. При фолликулярной лимфоме (неходжкинской лимфоме) с высокой опухолевой массой взрослым сочетано с индукционной химиотерапией может быть назначен препарат Интрон-А (эффективность препарата Интрон-А у пациентов с фолликулярной лимфомой с низкой опухолевой нагрузкой доказана не была). Препарат Интрон-А также может применяться для лечения пациентов с саркомой Капоши на фоне синдрома приобретенного иммунодефицита при отсутствии оппортунистических инфекций и числом клеток CD4 более 250/мм3.

Способ примененияЛечение препаратом Интрон-А должен назначать врач, имеющий соответствующий опыт. В зависимости от решения врача инъекции проводятся или медицинским персоналом или пациентом самостоятельно (самостоятельно допускается только подкожное введение после соответствующего инструктажа). Инъекции должны проводиться согласно правилам асептики. Перед введением раствора следует убедиться в отсутствии в нём видимых частиц или изменений цвета препарата. Содержимое шприц-ручки или флакона можно применять только для лечения одного пациента. Внутривенные и подкожные инъекции проводятся сразу после набора раствора в шприц из флакона. Для внутривенного введения необходимую дозу препарата Интрон-А набирают из флакона и растворяют в 100 мл физиологического раствора (концентрация в инфузионном растворе не должна быть меньше 0,3 млн МЕ/мл). Раствор для инфузий вводят сразу после приготовления (в/в капельно в течение 20 минут). Запрещено введение других препаратов одновременно с раствором Интрон-А, а также введение других препаратов через ту же систему. Раствор в шприц-ручках вводят подкожно непосредственно после присоединения иглы и набора дозы. Необходимо использовать новую иглу для каждой инъекции. За 30-40 минут до проведения инъекции раствор достают из холодильника (рекомендуется вводить раствор комнатной температуры). После того, как упаковка была вскрыта, раствор из шприц-ручки необходимо использовать в течение 28 дней, хранить в перерывах между инъекциями раствор следует в холодильнике. После использования шприц-ручки и флаконы утилизируют согласно действующим правилам.

Дозы препарата Интрон-А:Расчет дозы, продолжительность курса терапии и сопутствующее лечение назначает врач индивидуально каждому пациенту. Хронический гепатит В: Взрослым обычно рекомендуется назначение 30-35 млн МЕ 1 раз в неделю подкожно. Альтернативным вариантом является ежедневное введение 5 млн МЕ или введение 10 млн МЕ трижды в неделю. Длительность курса лечения составляет 16 недель. Детям 1-17 лет при хроническом гепатите В обычно рекомендуется назначение 3 млн МЕ/м2 трижды в неделю. Начиная со второй недели лечения переходят на введение 6 млн МЕ/м2 трижды в неделю. Длительность курса лечения – 16-24 недели. Лечение необходимо прекратить при отсутствии положительной динамики (согласно данным исследований ДНК HBV) после 3 месяцев применения максимальной рекомендуемой дозы. Дозу рекомендуется уменьшать на 50% в случае развития нарушений со стороны системы крови (в том числе при снижении уровня лейкоцитов менее 1500/мм3, гранулоцитов менее 1000/мм3 и 750/мм3 (у детей и у взрослых соответственно), тромбоцитов менее 100000/мм3 и 50000/мм3 (у детей и у взрослых соответственно)). После нормализации состояния терапия может быть продолжена в стандартных дозах. Хронический гепатит С: Препарат Интрон-А обычно назначают в дозе 3 млн МЕ трижды в неделю. В комбинированной терапии дозы назначают в зависимости от сопутствующих препаратов. При рецидиве после курса монотерапии интерфероном-альфа Интрон-А применяют в комплексе с рибавирином. Курс лечения около 6 месяцев. Пациентам, которые ранее не получали лечения, Интрон-А назначают в монотерапии только в случае непереносимости рибавирина или наличия других противопоказаний к его применению. Продолжительность курса лечения определяется в зависимости от генотипа вируса и содержания РНК вируса, средняя продолжительность лечения составляет 6 месяцев. В некоторых случаях курс может быть продлен до 12 месяцев (в таком случае следует принимать во внимание другие факторы риска, а также рассчитывать эффективность (в некоторых случаях, если спустя 6 месяцев терапии РНК HVC ещё определяется в плазме, дальнейшая терапия препаратом Интрон-А неэффективна)). При монотерапии спустя 4 месяца после начала лечения проводят определение РНК HVC и продолжают лечение только в случае, если РНК HVC не выявлена. Детям дозу рассчитывают по формуле 3 млн МЕ/м2 дважды в неделю сочетано с пероральным приемом рибавирина. Папилломатоз гортани Обычно назначают Интрон-А в дозе 3 млн МЕ/м2 подкожно трижды в неделю. Лечение целесообразно проводить после лазерного (хирургического) удаления опухолевой ткани. Учитывая переносимость препарата дозу можно увеличивать. Курс лечения – около 6 месяцев. Волосатоклеточный лейкоз Обычно назначают Интрон-А в дозе 2 млн МЕ/м2 подкожно трижды в неделю после спленэктомии или без неё. Данный режим дозирования используется в течение всего курса заболевания, исключая случаи быстрого прогрессирования заболевания или плохой переносимости препарата Интрон-А. Курс лечение – около 6 месяцев. Хронический миелолейкоз Обычно назначают препарат Интрон-А в дозе 4-5 млн МЕ/м2 подкожно 1 раз в сутки. Возможно назначение препарата Интрон-А сочетано с цитарабином. После нормализации уровня лейкоцитов препарат Интрон-А вводят в максимально высокой переносимой дозе (5 млн МЕ/м2) с целью поддержания гематологической ремиссии. Если на протяжении 7-8 недель не достигнута полная или частичная ремиссия препарат отменяют. Тромбоцитоз у пациентов с хроническим миелолейкозом Интрон-А применяют в тех же дозах, что и при хроническом миелолейкозе. Необходим постоянный контроль уровня тромбоцитов и лейкоцитов. Множественная миелома Пациентам, достигшим фазы плато (уменьшения парапротеина более чем на 50%) Интрон-А назначают в виде монотерапии в дозе 3-5 млн МЕ/м2 подкожно трижды в неделю. Фолликулярная лимфома Интрон-А назначают в дозе 5 млн МЕ трижды в неделю в комплексе с химиотерапией. Продолжительность применения препарата Интрон-А составляет 18 месяцев. Саркома Капоши на фоне синдрома приобретенного иммунодефицита Препарат эффективен в дозе 30 млн МЕ/м2 подкожно 3-5 раз в неделю. Кроме того, в клинических исследованиях препарат применяли в дозе 10-12 млн МЕ/м2 в сутки без значительного снижения эффективности. Схему лечения и дозы определяет врач, кроме того по решению врача может быть назначена комбинированная терапия препаратом Интрон-А и зидовудином. Рак почки Оптимальные дозы не установлены. Эффект отмечался при применении 3-30 млн МЕ/м2 5 или три раза в неделю или ежедневно. Максимальный эффект в монотерапии отмечался при применении 3-10 млн МЕ/м2 трижды в неделю. В комплексном лечении Интрон-А может быть назначен одновременно с интерлейкином-2 – дозы подбираются индивидуально. Карциноидные опухоли Средняя рекомендованная доза составляет 5 млн МЕ (от 3 до 9 млн МЕ в зависимости от переносимости и эффективности) трижды в неделю подкожно. При распространенном процессе может потребоваться применении 5 млн МЕ ежедневно. На время хирургического лечения применение препарата Интрон-А приостанавливают. Злокачественная меланома С целью индукции постоперационной ремиссии препарат назначают в дозе 20 млн МЕ/м2 в сутки внутривенно (в виде инфузии) 5 дней в неделю в течение 4 недель. Лечение рекомендуется начать в течение 56 дней после проведения хирургического вмешательства. Поддерживающая доза составляет 10 млн МЕ/м2 подкожно трижды в неделю. Продолжительность поддерживающего курса 48 недель. При плохой переносимости (выраженных побочных эффектах, изменении картины крови и уровня печеночных ферментов) лечение прекращают до нормализации показателей. Возобновлять лечение рекомендуется в дозе 50% от стандартной.

Рекомендации по применениюПеред началом терапии и в течение всего периода лечения следует контролировать состояние пациента: проводить клинический анализ крови, биохимический анализ крови, а также мониторинг функции печени и почек. У пациентов с хроническим гепатитом В и С контроль лабораторных показателей рекомендуется осуществлять в 1, 2, 4, 8, 12 и 16 недели лечения, а после этого ежемесячно на протяжении всего курса терапии. Учитывая лабораторные показатели, врач принимает решение о возможности дальнейшего применения препарата Интрон-А или о необходимости его отмены.

Побочные действия В ходе клинических исследований с широким спектром показаний и широким диапазоном доз наиболее частыми побочными эффектами препарата Интрон-А были утомляемость, лихорадка, боль в мышцах и головная боль, которые самостоятельно проходили спустя 72 часа после прекращения терапии. Несмотря на то, что лихорадка является побочным эффектом, при её развитии следует провести диагностику и исключить другие возможные причины развития лихорадки. Также при терапии препаратом Интрон-А у пациентов возможно такое нежелательное влияние: На нервную систему: усталость, головная боль, астения, раздражительность, депрессивные состояния, нарушения сна, а также беспокойство, снижение концентрации внимания и эмоциональная лабильность. Кроме того, возможно развитие суицидальных наклонностей, агрессии, психоза, нейропатии, энцефалопатии, нарушений сознания, полинейропатии, цереброваскулярной геморрагии, судорог и цереброваскулярной ишемии. На пищеварительный тракт: анорексия, рвота, тошнота, диспепсия, боль в эпигастрии, нарушения стула, колит, панкреатит, повышение аппетита. На сердце, сосуды и систему крови: ощущение сердцебиения, аритмия, артериальная гипотензия, ишемия и инфаркт миокарда, переходящая обратимая кардиомиопатия. На костно-мышечную систему: боль в костях и мышцах, артралгия, рабдомиолиз, боль в спине, миозит. На дыхательную систему: кашель, фарингит, диспноэ, пневмония, пневмонит, легочный инфильтрат. На мочевыделительную систему: снижение функции почек, почечная недостаточность, нефротический синдром. На орган зрения: очаговые изменения глазного дна, тромбоз сосудов сетчатки, кровоизлияния в сетчатку, уменьшение полей зрения, снижение остроты зрения, отек диска зрительного нерва, неврит зрительного нерва. На лабораторные показатели: снижение уровня гранулоцитов, лейкоцитов, тромбоцитов, гемоглобина, увеличение уровня креатинина и азота мочевины в плазме, повышение активности ЩФ, ЛДГ, АЛТ/АСТ. Местные реакции: некроз в месте инъекции, боль и воспаление в месте введения. Аллергические реакции: зуд и сухость кожи, алопеция, синдром Стивенса-Джонсона, кожная сыпь, отек лица, анафилактический шок, ангионевротический отек, синдром Лайелла. Другие: озноб, лихорадка, гриппоподобный синдром, лабильность массы тела, вирусные инфекции, гиповолемия, псориаз, бактериальные и грибковые инфекции, саркоидоз. Кроме того, возможно развитие аутоиммунных нарушений, включая идиопатическую или тромботическую тромбоцитопеническую пурпуру, ревматоидный артрит, васкулит, системную красную волчанку и синдром Фогта-Коянаги-Харады. Также при лечении препаратом Интрон-А возможно развитие гипергликемии, нарушений слуха, гипертриглицеридемии, кровоточивости десен, гепатотоксичности (вплоть до летального исхода). При комбинированной терапии рибавирином и препаратом Интрон-А у пациентов возможно развитие патологий зубов и периодонта, аплазии костного мозга, апластической анемии. При развитии побочных эффектов во время терапии препаратом Интрон-А рекомендуется снизить дозу препарата или временно прекратить лечение рекомбинантным интерфероном альфа-2b. При развитии непереносимости препарата или прогрессировании заболевания Интрон-А отменяют. Первые инъекции препарата Интрон-А следует проводить под контролем медицинского персонала и при наличии средств первой помощи (в связи с риском развития аллергических реакции немедленного типа, включая бронхоспазм, анафилаксию и ангионевротический отек). Для снижения риска артериальной гипотензии во время лечения препаратом Интрон-А рекомендуется обеспечить адекватную гидратацию (артериальная гипотензия при применении рекомбинантного интерферона может быть обусловлена снижением объема циркулирующей крови). При появлении кашля одышки и других побочных эффектов со стороны дыхательной системы следует провести обследование пациента (включающее рентгеновское исследование) для исключения наличия инфильтрата в легких и пневмонии. При развитии нарушений со стороны психики следует тщательно контролировать пациента и снизить дозу рекомбинантного интерферона альфа-2b, в случае сохранения агрессии и суицидальных мыслей препарат отменяют.

ПротивопоказанияИнтрон-А противопоказан пациентам с непереносимостью какого-либо компонента раствора. Интрон-А не назначают пациентам с выраженными заболеваниями сердца, в том числе декомпенсированной сердечной недостаточностью, инфарктом миокарда (в том числе недавно перенесенным инфарктом миокарда), тяжелыми формами аритмии. Препарат Интрон-А не применяют у пациентов с нарушенной функцией печени и почек, в том числе при метастазах, хронической форме гепатита с циррозом печени в период декомпенсации, аутоиммунным гепатитом и хроническим гепатитом у пациентов, получающих иммунодепрессанты (исключая кратковременную терапию глюкокортикостероидами). Интрон-А противопоказан пациентам с эпилепсией и прочими нарушениями функций центральной нервной системы, психическими расстройствами и заболеваниями у подростков и детей. Не следует назначать Интрон-А пациентам, у которых в анамнезе есть аутоиммунные заболевания, а также пациентам, которые получают иммунодепрессанты после проведения трансплантации. Интрон-А не применяют у пациентов с заболеваниями щитовидной железы, в случае отсутствия адекватной терапии. Комплексную терапию препаратом Интрон-А и рибавирином не назначают пациентам с клиренсом креатинина менее 50 мл/мин. Нежелательно назначение препарата Интрон-А мужчинам, партнерши которых беременны. Интрон-А в педиатрической практике применяют для лечения детей старше 1 года, страдающих папилломатозом гортани и хроническим гепатитом В. Осторожность следует соблюдать, назначая препарат Интрон-А пациентам, в анамнезе которых есть указания на психические заболевания, а также лицам пожилого возраста. Интрон-А с осторожностью назначают пациентам, страдающим тяжелыми формами хронических заболеваний, включая хроническую обструктивную болезнь легких и сахарный диабет с риском кетоацидоза, а также пациентам с нарушениями свертываемости крови, выраженной миелосупрессией, артериальной гипертензией. Только после тщательной оценки пользы и рисков препарат Интрон-А можно назначать пациентам с саркоидозом и псориазом (в связи с возможностью обострения данных заболеваний при терапии интерферонами). Интрон-А следует с осторожностью применять у пациентов со склонностью к аутоиммунным заболеваниям, а также ВИЧ-положительным пациентам, которые получают антиретровирусную терапию. Особую осторожность следует соблюдать при назначении и подборе дозы препарата Интрон-А пациентам, которые получают химиотерапию (в связи с риском повышения токсичности химиотерапевтических препаратов). Пациенты должны быть предупреждены, что во время терапии препаратом Интрон-А возможно развитие слабости, головокружения и прочих эффектов, которые повышают опасность управления автомобилем и другими механизмами.

БеременностьИсследования препарата Интрон-А на беременных женщинах не проводилось. В ходе исследований на животных было выявлено токсическое влияние рекомбинантного интерферона альфа-2b на репродуктивную систему. Во время беременности препарат Интрон-А назначают только по жизненным показаниям. Нет данных о проникновении компонентов препарата Интрон-А в грудное молоко. В период лактации при необходимости терапии препаратом Интрон-А необходимо прекратить кормление грудью. Если один из партнеров получает терапию рекомбинантным интерфероном альфа-2b, следует использовать надежный метод контрацепции (не рекомендуется планировать беременность в течение 6 месяцев после окончания терапии препаратом Интрон-А). Лейкоцитарный интерферон у женщин приводит к снижению уровня прогестерона и эстрадиола. У мужчин репродуктивного возраста следует с осторожностью применять препарат Интрон-А.

Лекарственное взаимодействиеИнтрон-А с осторожностью назначают сочетано с наркотическими анальгетиками, седативными и снотворными лекарственными средствами, а также препаратами с потенциальным миелосупрессивным действием (например, зидовудином). Интрон-А может оказывать влияние на окислительные метаболические процессы и изменять фармакокинетический профиль препаратов, метаболизирующихся путем окисления (например, аминофиллина и теофиллина). При необходимости сочетанного применения интерферона рекомбинантного альфа-2b с теофиллином следует контролировать плазменные концентрации последнего и своевременно корректировать его дозы. Интрон-А может потенцировать токсические эффекты химиотерапевтических препаратов (включая доксорубицин, цитарабин, тенипозид и циклофосфамид). Отмечается повышение риск развития васкулита при сочетанном применении препарата Интрон-А и гидроксимочевины. Запрещено смешивать раствор Интрон-А с другими препаратами (исключая 0,9% раствор натрия хлорида для инъекций).

ПередозировкаПри применении препарата Интрон-А развитие передозировки не отмечалось. При применении завышенных доз препарата Интрон-А необходимо контролировать состояние пациента, включая мониторинг функции жизненно-важных органов.

Форма выпускаРаствор для парентерального применения Интрон-А в стеклянных флаконах по 10 млн МЕ/1 мл (1 доза по 10 млн МЕ во флаконе), 18 млн МЕ/3 мл (6 доз по 3 млн МЕ во флаконе) и по 25 млн МЕ/3 мл (5 доз по 5 млн МЕ во флаконе), в картонной пачке 1 флакон. Раствор для парентерального применения Интрон-А в шприц-ручках по 6 доз, в картонной пачке 1 шприц-ручка в комплекте с 6 иглами и 6 салфетками для дезинфекции.

Условия храненияИнтрон-А следует хранить в недоступных детям местах, где поддерживается температурный режим от 2 до 8 градусов Цельсия. Допускается транспортировка препарата Интрон-А при температурном режиме от 15 до 25 градусов Цельсия в течение не более 7 дней. Спустя этот срок препарат должен быть возвращен в температурный режим от 2 до 8 градусов Цельсия. Если препарат хранился более 7 дней при температуре выше 8 градусов Цельсия – использовать его запрещено.

Срок годности препарата Интрон-А при соблюдении рекомендаций по хранению и транспортировке составляет:Для препарата во флаконах 10 млн МЕ – 1,5 года; Для препарата во флаконах 18 и 25 млн МЕ – 2 года; Для препарата в шприц-ручках – 1 год 3 месяца.

СоставФлаконы:1 доза, содержащая 10 млн МЕ интерферона рекомбинантного альфа-2b в 1 мл (10 млн МЕ во флаконе); 6 доз, содержащих по 3 млн МЕ интерферона рекомбинантного альфа-2b в 3 мл (18 млн МЕ во флаконе); 5 доз, содержащих по 5 млн МЕ интерферона рекомбинантного альфа-2b в 2,5 мл (25 млн МЕ во флаконе);

Шприц-ручки:6 доз, содержащих по 3 млн МЕ интерферона рекомбинантного альфа-2b (18 млн МЕ в шприц-ручке); 6 доз, содержащих по 5 млн МЕ интерферона рекомбинантного альфа-2b (30 млн МЕ в шприц-ручке); 6 доз, содержащих по 10 млн МЕ интерферона рекомбинантного альфа-2b (60 млн МЕ в шприц-ручке); Полезный объем шприц-ручки 1,2 мл (для всех дозировок).

Препарат является водорастворимым глобулярным белком, имеющим молекулярную массу порядка 19300 дальтон, синтезированный штаммом Escherichia coli, содержащим плазмидный гибрид, который получен методами генной инженерии, у которого в генетический аппарат встроен ген человеческого лейкоцитарного интерферона альфа-2b.

Фармакологическая группаПротивомикробные и противопаразитарные средства Противовирусные лекарственные средства Интерфероны

Действующее вещество: интерферон альфа-2b

Способ применения и дозы:

Лечение Интроном А должен проводить врач, имеющий опыт лечения соответствующего заболевания. По решению врача пациент может самостоятельно вводить себе препарат п/к для продолжения подобранного режима терапии.

Дозировка подбирается врачом индивидуально в зависимости от заболевания и общего состояния пациента (вес и возраст).

Перед введением необходимо визуально убедиться в отсутствии видимых частиц и изменения цвета раствора.

Флакон или шприц-ручка используются для лечения только одного пациента.

Интрон А раствор для инъекций в шприц-ручках вводят п/к сразу же после присоединения иглы для инъекций и набора необходимой дозы.

Препарат следует достать из холодильника за 30 минут до проведения инъекции, чтобы раствор прогрелся до комнатной температуры (до 25°С).

Для введения каждой дозы следует использовать новую иглу.

После вскрытия упаковки препарат рекомендуется использовать в течение 4 недель при условии хранения при температуре от 2° до 8°С. После инъекции иглу следует выбросить, а ручку немедленно поместить в холодильник.

Шприц-ручки Интрон А бывают трех видов, в зависимости от содержания в них активного вещества — рекомбинантного интерферона альфа-2b — 18 млн. ME, 30 млн. ME или 60 млн. ME. Каждая шприц-ручка предназначена для введения нескольких терапевтических доз. Врач должен указать пациенту объем дозы для каждого введения. Цвет полоски, расположенной по окружности корпуса шприц-ручки, и кнопки индивидуален для каждого вида шприц-ручки и зависит от ее дозировки — коричневый для 18 млн. ME, голубой для 30 млн. ME и розовый для 60 млн. ME.

Перед инъекцией следует убедиться в том, что шприц-ручка соответствует именно той дозе, которую назначил врач. Для этого следует проверить цвет полоски и кнопки и дозировку, указанную на упаковке.

Инъекцию следует проводить с соблюдением условий асептики и антисептики.

Выбор места инъекции: рекомендуется производить инъекцию под кожу бедра, наружной поверхности плеча или живота (кроме области пупка и талии). Если подкожно-жировая клетчатка в области живота недостаточно развита, следует проводить инъекции только в бедро или наружную поверхность плеча (для инъекции в эту область пациенту может понадобиться посторонняя помощь). Каждый раз следует выбирать новое место для инъекции.

После того как введено полное число доз из шприц-ручки (обычно 6 или столько, сколько назначил врач), в ней останется небольшое количество раствора. Этим остатком пользоваться нельзя, учитывая невозможность точного дозирования. Наличие избыточного количества раствора необходимо для того, чтобы можно было удалить воздух из иглы перед инъекцией, сохранив при этом необходимое количество доз.

ИНТРОН® А (INTRON® A)

Хронический гепатит В

Рекомендуемая доза для взрослых

составляет от 30 до 35 млн.МЕ в неделю п/к, либо в дозе 5 млн.МЕ ежедневно, либо 10 млн.ME 3 раза в неделю в течение 4 месяцев (16 недель).

Детям от 1 года до 17 лет включительно

Интрон® А вводят п/к в начальной дозе 3 млн.МЕ/м2 3 раза в неделю (через день) в течение первой недели лечения с последующим увеличением дозы до 6 млн.МЕ/м2 (максимум до 10 млн.МЕ/м2) 3 раза в неделю (через день). Продолжительность курса лечения 4-6 мес (16-24 недели).

Лечение прекращают при отсутствии положительной динамики (по данным исследования ДНК вируса гепатита В /HBV/) после 3-4 мес лечения препаратом в максимальной переносимой дозе.

Рекомендации по коррекции дозы

Дозу препарата следует уменьшить на 50% при развитии нарушений со стороны системы кроветворения (лейкоциты <1500/мм3, гранулоциты <1000/мм3 у детей и <750/мм3 у взрослых, тромбоциты <100 000/мм3 у детей и <50 000/мм3 у взрослых).

Терапию следует прекратить в случае выраженной лейкопении (лейкоциты <1200/мм3), нейтропении (гранулоциты <750/мм3 у детей и <500/мм3 у взрослых) или тромбоцитопении (тромбоциты <70 000/мм3 у детей и <30 000/мм3 у взрослых).

Лечение может быть возобновлено в прежней дозе после нормализации или возврата к исходному уровню числа лейкоцитов, гранулоцитов и тромбоцитов.

Хронический гепатит С

Интрон® А назначают п/к в дозе 3 млн.ME 3 раза в неделю (через день) в качестве монотерапии или в комбинации с рибавирином (дозы и рекомендации по их подбору в инструкции по применению рибавирина в капсулах в составе комбинированной терапии).

При лечении пациентов с рецидивом после курса монотерапии интерфероном альфа

Интрон® А назначают только в комбинации с рибавирином. На основании результатов клинических исследований, проводившихся в течение 6 мес, рекомендуемая продолжительность комбинированного лечения с рибавирином составляет 6 мес.

При лечении пациентов, ранее не получавших терапию

, эффективность Интрона А повышается при одновременном применении с рибавирином. Монотерапию препаратом проводят только при наличии противопоказаний к применению или непереносимости рибавирина.

Применение Интрона А в комбинации с рибавирином

На основании результатов клинических исследований, проводившихся в течение 12 мес, рекомендуемая продолжительность комбинированной терапии с рибавирином составляет, по крайней мере, 6 мес.

У пациентов с генотипом 1 вируса и высоким содержанием РНК вируса (по результатам исследования, проведенного до начала терапии), у которых к концу первых 6 мес. терапии в сыворотке крови не определяется РНК вируса гепатита С (HCV), лечение продолжают еще 6 мес (т.е. в общей сложности 12 мес). При принятии решения о проведении комбинированной терапии в течение 12 мес следует также принимать во внимание другие отрицательные прогностические факторы: возраст старше 40 лет, мужской пол, прогрессирующий фиброз.

При проведении клинических исследований установлено, что у пациентов, у которых после 6 мес терапии по-прежнему определяется РНК HCV, продолжение лечения не приводит к элиминации РНК HCV.

При применении Интрона А в комбинации с рибавирином следует проводить тщательное наблюдение за пациентами с нарушениями функции печени

и
пациентами старше 50 лет
в связи с возможным развитием анемии.

Детям от 3 лет и старше

Интрон® А назначают п/к по 3 млн.МЕ/м2 2 раза в неделю в комбинации с пероральным приемом рибавирина в дозе 15 мг/кг ежедневно, разделяя эту дозу на утреннюю и вечернюю.

Монотерапия Интроном А

Интрон® А рекомендуют применять в течение, по крайней мере, 3-4 мес, после этого следует провести определение РНК HCV. Затем лечение продолжают только в том случае, если РНК HCV не выявлена.

Для пациентов, хорошо переносящих терапию, с нормализацией АЛТ на 16 неделе лечения, рекомендуемый курс лечения составляет от 18 до 24 мес.

Папилломатоз гортани

Рекомендуемая доза Интрона А составляет 3 млн.МЕ/м2 п/к 3 раза в неделю (через день). Лечение начинают после хирургического (лазерного) удаления опухолевой ткани. Дозу увеличивают с учетом переносимости препарата. Для достижения положительного ответа может потребоваться проведение терапии в течение более чем 6 мес.

Волосатоклеточный лейкоз

Рекомендуемая доза Интрона А для п/к введения пациентам после спленэктомии и без нее составляет 2 млн. МЕ/м2 3 раза в неделю. В большинстве случаев нормализация одного и более гематологических показателей наступает через 1-2 мес лечения. Для нормализации показателей периферической крови (числа лейкоцитов, тромбоцитов и уровня гемоглобина) может потребоваться до 6 мес лечения Интроном А. Этого режима дозирования следует придерживаться постоянно, если только при этом не происходит быстрое прогрессирование заболевания или возникновение тяжелой непереносимости препарата.

Хронический миелолейкоз

Рекомендуемая доза Интрона А составляет 4-5 млн.МЕ/м2 п/кежедневно. В некоторых случаях эффективной является комбинация Интрона А в дозе 5 млн.МЕ/м2 , назначаемого ежедневно п/к, с цитарабином (Аrа-С) в дозе 20 мг/м п/к в течение 10 дней в месяц (максимальная суточная доза — 40 мг).

После нормализации числа лейкоцитов Интрон® А вводят в максимальной переносимой дозе (4-5 млн. МЕ/м2/сут) для поддержания гематологической ремиссии.

Интрон® А следует отменить через 8-12 недель лечения, если к этому времени не достигнута, по крайней мере, частичная гематологическая ремиссия или клинически значимое снижение числа лейкоцитов.

Тромбоцитоз у пациентов с хроническим миелолейкозом

Рекомендуются те же дозы, что и при лечении хронического миелолейкоза. Коррекция дозы, используемая для контроля числа лейкоцитов, может также применяться для контроля числа тромбоцитов.

Клинические данные свидетельствуют о том, что примерно у одной четверти (26%) пациентов с хроническим миелолейкозом отмечается сопутствующий тромбоцитоз (число тромбоцитов >500×109/л). Снижения числа тромбоцитов удавалось добиться у всех пациентов после 2 мес. лечения. Число тромбоцитов никогда не было <80×109/л, при ежемесячном контроле.

Множественная миелома

Пациентам, у которых в результате индукционной терапии достигнута фаза плато (уменьшение парапротеина более чем на 50%), Интрон® А можно назначать в качестве поддерживающей монотерапии в дозе 3-5 млн. МЕ/м2 п/к 3 раза в неделю.

Фолликулярная лимфома

В сочетании с химиотерапией Интрон® А назначают п/к в дозе 5 млн. ME 3 раза в неделю (через день) в течение 18 мес. Клинические данные имеются только по применению CHVP (комбинация циклофосфамида, доксорубицина, тенипозида и преднизолона) в виде 6-месячных циклов и последующих 6 циклов, проводимых 1 раз в 2 месяца.

Саркома Капоши, связанная со СПИД

Оптимальная доза не установлена. Показана эффективность Интрона А в дозе 30 млн. МЕ/м2 при п/к введении 3-5 раз в неделю. Препарат также применяли в меньших дозах (10-12 млн. МЕ/м2/сут) без заметного снижения эффективности.

Если заболевание стабилизируется или есть клинический ответ на лечение, терапию продолжают до тех пор, пока не будет отмечен рост опухоли или не потребуется отмена препарата из-за развития тяжелой оппортунистической инфекции или побочного эффекта. У этих пациентов терапию Интроном А можно проводить в амбулаторных условиях.

Одновременное применение с зидовудином.

В клинических исследованиях пациенты со СПИД и саркомой Капоши получали Интрон® А в сочетании с зидовудином. В большинстве случаев хорошо переносилась пациентами следующая схема лечения: Интрон® А в дозе 5-10 млн. МЕ/м2; зидовудин 100 мг каждые 4 ч. Основным токсическим эффектом, ограничивавшим дозу, была нейтропения.

Лечение Интроном А можно начать с дозы 3-5 млн. МЕ/м2/сут. Через 2-4 недели доза Интрона А может быть увеличена на 5 млн. МЕ/м2/сут — до 10 млн. МЕ/м2/сут, с учетом переносимости; доза зидовудина может быть повышена до 200 мг/4 ч. Дозу следует подбирать индивидуально, с учетом эффективности и переносимости.

Рак почки

Монотерапия.

Оптимальная доза и схема применения при монотерапии не установлены. Интрон® А применяли в дозах 3-30 млн. МЕ/м2 п/к 3-5 раз в неделю или ежедневно. Максимальный эффект наблюдался при п/к применении Интрона А в дозах 3-10 млн. МЕ/м2 3 раза в неделю.

В комбинации с другими лекарственными средствами (в т.ч. интерлейкином-2)

оптимальная доза не установлена. В комбинации с интерлейкином-2 Интрон А применяли п/к в дозах 3-20 млн. МЕ/м2. В клинических исследованиях частота ответа на лечение была максимальной при п/к введении Интрона А в дозе 6 млн. МЕ/м2 3 раза в неделю (дозу подбирали индивидуально во время лечения).

Карциноидные опухоли

Стандартная доза Интрона А составляет 5 млн. МЕ/м2 (3-9 млн. ME) п/к 3 раза в неделю (через день). У пациентов с распространенным процессом может потребоваться применение дозы до 5 млн. МЕ/м2 ежедневно.

При хирургическом лечении терапию Интроном А приостанавливают на время операции и восстановительного периода после нее. Терапию препаратом продолжают до тех пор, пока наблюдается клинический ответ на проводимое лечение.

Злокачественная меланома

Для индукции ремиссии Интрон® А назначают в/в в дозе 20 млн. МЕ/м2/сут 5 дней в неделю на протяжении 4 недель. Рассчитанную таким образом дозу добавляют к 0.9% раствору натрия хлорида и вводят в виде инфузии в течение 20 мин. Лечение следует начинать в течение 56 дней после хирургического вмешательства. Для поддерживающей терапии рекомендуемая доза составляет 10 млн. МЕ/м2 п/к 3 раза в неделю (через день) в течение 48 недель.

При развитии тяжелых побочных эффектов во время терапии Интроном А (в частности при снижении числа гранулоцитов <500/мм3 или повышении АЛТ/АСТ до значений, превышающих ВГН в 5 раз) применение препарата прекращают до нормализации показателей. Затем лечение возобновляют, используя дозу, уменьшенную на 50%. Если непереносимость сохраняется, или если число гранулоцитов уменьшается до 250/мм3, или активность АЛТ и/или ACT возрастает до значений, превышающих ВГН в 10 раз, препарат отменяют.

Хотя оптимальная (минимальная) доза для достижения адекватного клинического эффекта не установлена, Интрон® А следует назначать в рекомендуемых дозах с учетом их возможной коррекции из-за токсического действия, как описано выше.

Правила приготовления и введения растворов

Перед введением необходимо визуально убедиться в отсутствии видимых частиц и изменения цвета раствора.

Флакон или шприц-ручка используются для лечения только одного пациента.

Интрон® А раствор для инъекций во флаконах

можно вводить сразу же после набора из флакона необходимой дозы с помощью стерильного шприца для инъекций (стеклянного или пластикового).

Приготовление раствора для в/в введения

Инфузию следует проводить немедленно после приготовления раствора. Для измерения требуемой дозы препарата можно использовать флакон любого объема; при этом конечная концентрация интерферона альфа-2b в растворе натрия хлорида должна быть не менее 0.3 млн. МЕ/мл. Соответствующую дозу препарата набирают из флакона, добавляют к 50 мл 0.9% раствора натрия хлорида в мешок из ПВХ или в стеклянный флакон для инфузий и вводят в/в капельно в течение 20 мин.

Недопустимо одновременное введение других препаратов вместе с Интроном А.

Интрон® А раствор для инъекций в шприц-ручках

вводят п/к сразу же после присоединения иглы для инъекций и набора необходимой дозы.

Препарат следует достать из холодильника за 30 мин до проведения инъекции, чтобы раствор прогрелся до комнатной температуры (до 25°С).

Для введения каждой дозы следует использовать новую иглу.

Шприц-ручки

Интрон® А бывают трех видов, в зависимости от содержания в них активного вещества — рекомбинантного интерферона альфа-2b — 18 млн. ME, 30 млн. ME или 60 млн. ME. Каждая шприц-ручка предназначена для введения нескольких терапевтических доз. Врач должен указать пациенту объем дозы для каждого введения. Цвет полоски, расположенной по окружности корпуса шприц-ручки, и кнопки индивидуален для каждого вида шприц-ручки и зависит от ее дозировки — коричневый для 18 млн. ME, голубой для 30 млн. ME и розовый для 60 млн. ME.

Инъекцию следует проводить с соблюдением условий асептики и антисептики.

Противопоказания:

тяжелые заболевания сердечно-сосудистой системы (в том числе сердечная недостаточность в стадии декомпенсации, недавно перенесенный инфаркт миокарда, тяжелые аритмии);
выраженные нарушения функции печени (в т.ч. вызванные метастазами);
хронический гепатит с циррозом печени в стадии декомпенсации;
хронический гепатит у пациентов, получавших или получающих иммунодепрессанты (за исключением кратковременного курса терапии ГКС);
аутоиммунный гепатит;
эпилепсия и другие нарушения функции ЦНС, психические заболевания и расстройства у детей и подростков;
аутоиммунные заболевания в анамнезе;
применение иммунодепрессантов после трансплантации;
заболевание щитовидной железы в случае, если оно не контролируется соответствующей терапией;
КК<50 мл/мин (при назначении в комбинации с рибавирином);
беременность;
период лактации (грудного вскармливания);
назначение мужчинам, партнерши которых беременны;
повышенная чувствительность к любому компоненту препарата.

При назначении препарата Интрон А в комбинации с рибавирином следует также учитывать противопоказания, указанные в инструкции по применению рибавирина.

Теплолюбивая бактерия помогает понять происхождение интронов

Горячие источники в Беппу (Япония) — излюбленные места обитания термофильной цианобактерии Thermosynechococcus elongatus

. Фото с сайта nonstoptotokyo.co.uk

Характерной особенностью геномов высших организмов являются многочисленные интроны — некодирующие вставки в генах, которые вырезаются из РНК перед трансляцией (синтезом белка). Предполагают, что интроны эукариот произошли от особой разновидности мобильных генетических элементов — так называемых «интронов группы II», встречающихся у бактерий. Эта гипотеза получила новые подтверждения в ходе изучения термофильного микроба Thermosynechococcus elongatus

— бактерии, в геноме которой содержится наибольшее количество мобильных элементов этого типа. Высокая температура могла быть одной из главных причин быстрого размножения интронов группы II в геномах
T. elongatus
и древних эукариот.

Большинство генов эукариот содержит интроны — некодирующие вставки, которые необходимо вырезать из матричной РНК, прежде чем использовать ее в качестве матрицы для синтеза белка. Вырезание интронов и сшивание кодирующих участков мРНК (экзонов) называют сплайсингом. Большинство интронов в ядерных генах эукариот — это так называемые сплайсосомные интроны, которые удаляются из мРНК при помощи специальных молекулярных «машинок» — сплайсосом (подробнее о сплайсинге см. в заметках: Сравнение геномов человека и мыши помогло обнаружить новый способ регуляции работы генов, «Элементы», 21.04.2007; Почти все человеческие гены кодируют более одного белка, «Элементы», 08.11.2008).

Многие факты, обнаруженные в последние годы, указывают на то, что сплайсосомные интроны эукариот, скорее всего, произошли от так называемых «интронов группы II» (group II introns) — мобильных генетических элементов, встречающихся в геномах бактерий, митохондрий и пластид (органелл эукариотической клетки, произошедших от симбиотических бактерий). У архей они встречаются редко. По-видимому, некоторые археи приобрели интроны группы II от бактерий в результате горизонтального генетического обмена.

Интроны группы II являются разновидностью ретротранспозонов. Типичный интрон группы II содержит два функциональных блока: участок, способный сворачиваться в трехмерную структуру с каталитической активностью (рибозим), и ген белка IEP (intron-encoded protein).

Как и положено ретротранспозонам, интроны группы II умеют размножаться, встраивая свои копии в строго определенные места хозяйского генома. Происходит это так. Сначала интрон группы II должен быть транскрибирован, то есть хозяйская клетка должна синтезировать на матрице гена, содержащего интрон группы II, молекулу мРНК, в состав которой войдет и копия интрона. Затем та часть мРНК, которая кодирует белок IEP, вступает во взаимодействие с рибосомой и подвергается трансляции, то есть используется в качестве инструкции для синтеза белка IEP. Этот белок затем вступает во взаимодействие с той частью мРНК, которая является рибозимом, и помогает ей принять правильную трехмерную конфигурацию. После этого активированный рибозим осуществляет свой собственный сплайсинг: он вырезает сам себя из молекулы мРНК. Детали этого процесса очень похожи на «настоящий» сплайсинг, осуществляемый сплайсосомами. Это важный аргумент в пользу происхождения сплайсосомных интронов и сплайсосом от интронов группы II.

После этого комплекс из белка IEP и интрона разрезает хозяйскую ДНК в подходящем месте. У каждого интрона группы II есть свои излюбленные места для встраивания. Белок IEP осуществляет обратную транскрипцию, то есть синтезирует ДНК на матрице РНК интрона. Ферменты хозяйской клетки, отвечающие за копирование и починку ДНК, помогают завершить начатое, зашивая разрывы и синтезируя вторую (комплементарную) нить ДНК на матрице той нити, которую синтезировал IEP путем обратной транскрипции. В результате в геноме хозяйской клетки появляется новая копия интрона группы II.

Thermosynechococcus elongatus.

Фото с сайта www.wired.com

Предполагается, что древние эукариоты «заразились» интронами группы II от своих симбионтов — бактерий, которые стали предками митохондрий. В ядерных геномах эукариот интроны группы II чрезвычайно размножились и превратились в «обычные» сплайсосомные интроны. При этом обратно-транскриптазная активность была ими утрачена. Функциональные части интронов группы II, необходимые для сплайсинга, были выведены из их состава и дали начало так называемым малым ядерным РНК (small nuclear RNA, snRNA), которые представляют собой важнейшую составную часть сплайсосом. Другие интроны группы II, сохранившие в своем составе гены обратных транскриптаз, вероятно, дали начало одному из классов эукариотических ретротранспозонов (non-LTR-retrotransposons).

В этой красивой теории есть одна неясная деталь. В геномах большинства бактерий присутствует очень мало интронов группы II, часто лишь один-единственный. Их размножение в бактериальных геномах на самом деле сильно затруднено. Бактериальные клетки этому активно сопротивляются, разрушая РНК интронов при помощи ферментов-нуклеаз. Кроме того, отбор быстро закрепляет любые мутации, лишающие интрон активности, потому что размножение интронов группы II в общем случае вредно для хозяина. Как же удалось этим мобильным элементам так расплодиться в ядерных геномах эукариот?

В поисках ответа на этот вопрос биологи из Техасского университета в Остине обратили внимание на термофильную цианобактерию Thermosynechococcus elongatus,

обитающую в горячих источниках. Это единственная бактерия, в геноме которой обнаружено много — целых 28 — интронов группы II. Сходство нуклеотидных последовательностей этих 28 интронов привело авторов к выводу об их едином происхождении. Иными словами, все они являются потомками одного мобильного элемента, которым когда-то заразились предки
T. elongatus
. Это значит, что, в отличие от других бактерий, в геноме
T. elongatus
интронам группы II почему-то удалось неплохо размножиться. Авторы рассудили, что выяснение причин этого обстоятельства поможет разобраться в происхождении эукариотических интронов.

Оказалось, что из 28 интронов T. elongatus

три совсем деградировали под грузом мутаций, 17 содержат действующий рибозим, но лишены рабочего гена IEP, а 8 интронов содержат оба функциональных блока в исправном состоянии. Нуклеотидные последовательности любых двух интронов
T. elongatus
совпадают не менее чем на 85%. Среди известных бактериальных интронов самый похожий обнаружился у кишечной палочки
E. coli
(его сходство с интронами
T. elongatus
— около 50%).

Детальный анализ 17 интронов, лишенных гена IEP, показал, что все они происходят от одного предкового интрона, который сначала потерял IEP, а уже потом размножился в 17 копиях. Как он мог размножиться, не имея необходимого гена? Очевидно, ему помогли белки IEP, кодируемые другими, целыми интронами. Это важный вывод, показывающий, что белок IEP способен размножать не только «свой» интрон, но и другие похожие участки ДНК. Поэтому для успешного размножения интрону не обязательно иметь свой собственный IEP.

Более того, интроны, не имеющие своего IEP, размножаются даже эффективнее, чем «целые» интроны. Об этом свидетельствует повышенное число копий таких укороченных интронов по сравнению с целыми (17 против 8). Успешному размножению, вероятно, способствует их компактность, которая делает их более трудной добычей для бактериальных нуклеаз.

Вторичная структура одного из интронов T. elongatus.

Буквами ORF обозначена петля, содержащая ген белка IEP (последовательность нуклеотидов в нём не показана). E1 и E2 — прилегающие к интрону участки экзонов. Двумя
белыми стрелочками
(над участками E1 и E2) показаны места сплайсинга. Здесь РНК разрезается, после чего экзоны E1 и E2 сшиваются друг с другом. EBS (exon-binding site) — участки интрона, от которых зависит, в какие места ДНК может встроиться интрон. Это определяется комплементарностью участков EBS и IBS (intron-binding sites). В данном случае участок EBS1 содержит последовательность CGCUCG, которая комплементарна последовательности IBS1 (GCGAGC) экзона E1. Дополнительными буквами и
стрелочками
сбоку от основной последовательности показаны отличия данного интрона от других интронов
T. elongatus
. Рис. из обсуждаемой статьи в
PLoS Biology
Авторы изучили активность интронов T. elongatus

при помощи генно-инженерных экспериментов на классическом лабораторном объекте — кишечной палочке
E. coli
. В кишечную палочку пересаживали фрагмент ДНК, кодирующий рибозимную часть интрона, отдельно добавляли ген IEP и подходящий для встраивания данного интрона участок ДНК (копию сшитых вместе участков E1 и E2, см. рисунок). Этот участок помещали перед геном устойчивости к тетрациклину, который должен был активизироваться только в том случае, если размножение интрона и его встраивание пройдет успешно. В результате по количеству клеток, у которых появилась устойчивость к тетрациклину, можно было определить эффективность размножения интрона.

Эксперименты дали весьма любопытные результаты.

Во-первых, оказалось, что интроны T. elongatus

действительно активны, то есть сохранили способность размножаться и встраивать свои копии в ДНК хозяйской клетки.

Во-вторых, оба компонента интронов — и рибозим, и белок IEP — оказались термофильными, то есть теплолюбивыми. Интроны размножались гораздо лучше при 48°C, чем при 37°C.

В-третьих, подтвердилось предположение о том, что белки IEP способны размножать не только «свой» интрон, но и другие интроны, в том числе лишенные собственного гена IEP. Из семи белков IEP некоторые являются высоко избирательными: они размножают «свой» интрон гораздо лучше всех остальных. Другие, однако, оказались менее разборчивыми и размножали разные интроны примерно с одинаковой эффективностью.

В четвертых, было показано, что у всех интронов T. elongatus

способность к размножению сильно ослаблена из-за различных мутаций. Мутации, ослабляющие активность интронов, нашлись как в рибозимах, так и в генах IEP. Современные методы анализа структуры белков и рибозимов позволили авторам найти эти мутации и «исправить» их. Это привело в ряде случаев к стопроцентной размножаемости: «улучшенные» интроны встроились в подготовленный для них участок ДНК в 100% модифицированных клеток
E. coli
.

В ходе дальнейших экспериментов авторы случайным образом меняли последовательность нуклеотидов в участке, предназначенном для встраивания интрона, чтобы определить, насколько интроны избирательны в этом отношении. Выяснилось, что их избирательность не очень высока. Для успешного встраивания интрона в данную позицию (сайт) на ДНК лишь очень небольшое число нуклеотидов в этом сайте (иногда не более двух-трех) должны быть строго определенными и стоять в строго определенных местах. С этими нуклеотидами связываются по принципу комплементарности участки РНК интрона, обозначенные на рисунке буквами EBS (exon binding site). Эти участки у разных интронов разные, поэтому и встраиваются они в разные сайты. От строения белка IEP избирательность интронов, как выяснилось, почти не зависит.

Самое интересное, что «привередливость» интронов по отношению к сайтам встраивания снижается по мере роста температуры. Как выяснилось, высокая температура не только активизирует размножение интронов, но и позволяет им встраиваться в большее число разных точек на хозяйской ДНК. Скорее всего, это связано с тем, что при высокой температуре двойная цепь ДНК легче расплетается. Встраивание интрона начинается с того, что белок IEP находит (при помощи рибозима) подходящий сайт на ДНК, расплетает двойную спираль, а уже после этого рибозим своими EBS-участками присоединяется к одной из нитей ДНК.

Таким образом, авторы выявили три основных фактора, которые могли способствовать успешному размножению интронов группы II в геноме T. elongatus:

1) Высокая температура, облегчающая расплетание двойной спирали ДНК. Этим, по-видимому, объясняется тот факт, что единственной бактерией, в чьем геноме интронам группы II удалось размножиться, оказался термофильный T. elongatus

2) Благодаря мутациям в EBS-участках интроны T. elongatus

приобрели способность встраиваться в разные участки хозяйской ДНК. По этому признаку авторы смогли разделить 28 интронов на 6 «семейств». По-видимому, изменения EBS-участков не сильно сказываются на эффективности сплайсинга. Это значит, что интроны могут относительно свободно осваивать новые типы сайтов, и поэтому их размножение не может быть остановлено «насыщением» всех подходящих сайтов.

3) Некоторые белки IEP в ходе эволюции приобрели способность размножать не только «свои» интроны, но и «чужие». Это открывает возможность для быстрого размножения упрощенных, компактных интронов, утративших ген IEP и ставших менее уязвимыми для нуклеаз, при помощи которых хозяйская клетка пытается бороться с ними. Размножение таких упрощенных интронов, не способных своими собственными силами осуществить сплайсинг, создает предпосылки для формирования единой универсальной системы сплайсинга — что, очевидно, и произошло при превращении интронов группы II в сплайсосомные интроны эукариот.

Полученные результаты в целом хорошо согласуются с гипотезой о происхождении сплайсосомных интронов и сплайсосом от интронов группы II. Стало ясно, что при определенных условиях, особенно при высокой температуре, бактериальные интроны группы II могут размножаться очень быстро и встраиваться в разнообразные участки хозяйской ДНК. 2–3 миллиарда лет назад, когда появились первые эукариоты, климат на планете, скорее всего, был существенно теплее, чем теперь (см.: Экспериментальные белки помогают узнать о климате древнейших эпох, «Элементы», 09.02.2008). Поэтому предположение о том, что интроны группы II могли стремительно расплодиться в ядерном геноме первых эукариот, стало выглядеть значительно более правдоподобным. Кроме того, исследование показало, что у интронов группы II различные функции (сплайсинг, встраивание, обратная транскрипция) вполне отделимы друг от друга и не обязательно должны выполняться компонентами одного и того же интрона. Такая «диссоциабельность» (разделимость) и взаимозаменимость частей должна была существенно облегчить превращение одних интронов группы II в сплайсосомные интроны и сплайсосомы, а других — в эукариотические ретротранспозоны.

Помимо всего прочего, открытые авторами термофильные мобильные элементы и обратные транскриптазы могут найти целый ряд полезных применений в биотехнологии. Они могут пригодиться не только для генно-инженерных манипуляций с термофильными микробами, но и для разработки новых методов секвенирования РНК (см.: Reverse transcription polymerase chain reaction).

Источник:

Georg Mohr, Eman Ghanem, Alan M. Lambowitz. Mechanisms Used for Genomic Proliferation by Thermophilic Group II Introns //
PLoS Biology
8(6): e1000391.

См. также:

Ретровирусы помогают своим дальним родственникам встроиться в хозяйский геном, «Элементы», 20.01.2009.

Александр Марков

Особые указания:

При применении Интрона А в редких случаях наблюдались реакции гиперчувствительности немедленного типа (крапивница, ангионевротический отек, бронхоспазм, анафилаксия). В таких случаях, следует немедленно отменить препарат и принять соответствующие меры. Преходящая кожная сыпь не требует прекращения лечения.

При развитии тяжелых и среднетяжелых побочных эффектов может потребоваться коррекция режима дозирования или, в некоторых случаях, прекращение терапии. В случае появления на фоне применения Интрона А признаков нарушения функции печени за пациентом следует установить тщательное наблюдение и при прогрессировании симптомов отменить препарат.

На фоне применения Интрона А или в течение 2 дней после отмены лечения возможно развитие артериальной гипотензии, требующей назначения соответствующей терапии.

При лечении Интроном А следует обеспечить адекватную гидратацию организма путем дополнительного введения жидкости, поскольку в некоторых случаях артериальная гипотензия может развиться в результате уменьшения ОЦК.

Лихорадка может быть проявлением гриппоподобного синдрома, часто встречающего при применении интерферона альфа-2b, однако следует исключить другие причины ее возникновения.

Использование в педиатрии: Интрон А можно применять у детей от 1 года при хроническом гепатите В и папилломатозе гортани. Клинических данных о применении Интрона А у детей по другим показаниям не имеется.

Влияние на способность к вождению автотранспорта и управлению механизмами: пациента следует предупредить в возможности развития слабости, сонливости, нарушений сознания на фоне терапии и рекомендовать избегать управления транспортными средствами и механизмами.

Фармакологическое действие

Интерферон. Противоопухолевый, противовирусный и иммуномодулирующий препарат.

Интрон А — стерильный, стабильный препарат высокоочищенного интерферона альфа-2b, при производстве которого используются технологии рекомбинантной ДНК.

Рекомбинантный интерферон альфа-2b представляет собой водорастворимый белок с молекулярной массой около 19 300 дальтон. Его производят из клона Escherichia coli, содержащего плазмидный гибрид, полученный методами генной инженерии и включающий в себя ген интерферона альфа-2b из лейкоцитов человека.

Активность Интрона А выражают в международных единицах (ME); 1 мг рекомбинантного интерферона альфа-2b соответствует 2.6 x108 ME. Международные единицы определяют путем сравнения активности рекомбинантного интерферона альфа-2b с активностью стандартного препарата человеческого лейкоцитарного интерферона, установленного ВОЗ.

Интерфероны представляют собой белковые молекулы с молекулярной массой от 15 000 до 21 000 дальтон. Интерфероны продуцируются и секретируются клетками в ответ на вирусную инфекцию или другие возбудители. Выделяют три основные группы интерферонов: альфа, бета и гамма. Эти три группы сами также не являются однородными и могут содержать несколько различных молекулярных разновидностей интерферона. Выделено более 14 генетических разновидностей интерферона альфа. Интрон А классифицируется как рекомбинантный интерферон альфа-2b.

Интерфероны оказывают действие на клетки за счет связывания со специфическими рецепторами на их поверхности.

Результаты нескольких исследований свидетельствуют о том, что после связывания с клеточной мембраной, интерферон вызывает сложную последовательность внутриклеточных реакций, в т.ч. индукцию определенных ферментов. Полагают, что хотя бы частично эти процессы и определяют клеточные эффекты интерферона, включая подавление репликации вирусов в инфицированных клетках, угнетение пролиферации клеток, а также иммуномодулирующие свойства интерферона, такие как усиление фагоцитарной активности макрофагов и нарастание специфической цитотоксичности лимфоцитов по отношению к клеткам-мишеням. Эта активность может определять терапевтическое действие интерферона. Рекомбинантный интерферон альфа-2b оказывает антипролиферативное действие как в отношении культуры клеток человека и животных, так и в отношении ксенотрансплантатов опухолей человека и животных. Показана значительная иммуномодулирующая активность рекомбинантного интерферона альфа-2b in vitro. Рекомбинантный интерферон альфа-2b также подавляет репликацию вирусов in vitro и in vivo.

Хотя точный механизм противовирусного действия рекомбинантного интерферона альфа-2b неизвестен, установлено, что он нарушает метаболизм клетки, в которую проник вирус. Это приводит к подавлению репликации вируса, а в случаях, когда репликация все же происходит, вирионы с поврежденным геномом не способны покинуть клетку.

Хронический гепатит В

Клинические исследования применения интерферона альфа-2b в течение 4-6 месяцев показывают, что терапия может привести к элиминации ДНК вируса гепатита В (HBV) и улучшению гистологической картины печени. Элиминация ДНК HBV и HBeAg приводит к значительному снижению смертности.

Хронический гепатит С

Применение Интрона А в виде монотерапии или в комбинации с рибавирином изучали в 4 рандомизированных клинических исследованиях III фазы у 2552 пациентов с хроническим гепатитом С, не получавших ранее терапию интерфероном. В ходе исследований сравнивалась эффективность монотерапии или комбинированной терапии с рибавирином. Эффективность терапии определялась на основании отсутствия репликации вируса через 6 месяцев после окончания лечения.

Все пациенты имели хронический гепатит С, подтвержденный положительной ПЦР-реакцией на РНК вируса гепатита С (HCV) (>100 копий/мл), данными биопсии печени с гистологическим подтверждением хронического гепатита и отсутствием какой-либо другой причины для его возникновения, и повышением активности АЛТ.

Интрон А назначали в дозе 3 млн. ME 3 раза в неделю в качестве монотерапии или в комбинации с рибавирином. Большая часть пациентов получала лечение в течение года. Все пациенты наблюдались в течение 6 месяцев после окончания терапии для определения продолжительности сохранения результатов. Данные этих двух исследований приведены в таблице 1.

Комбинированная терапия рибавирином и Интроном А значительно повышала эффективность терапии у всех подгрупп пациентов. Генотип HCV и количество РНК вируса перед началом терапии являются прогностическими факторами. Улучшение результатов при применении комбинированной терапии наблюдается особенно у пациентов, трудно поддающихся лечению (с генотипом 1 вируса и высоким содержанием РНК HCV в сыворотке крови).

Таблица 1. Число больных со стойким вирусологическим ответом (%) после годичного курса лечения

* Интрон А (3 млн. ME 3 раза в неделю)

** Интрон А (3 млн. ME 3 раза в неделю) и рибавирин (1/1.2 г/сут.)

Строгое соблюдение схемы проводимой терапии значительно улучшает результаты лечения. Независимо от генотипа вируса, пациенты, получившие 80% и более курсовой терапии (рибавирин + Интрон А) имели лучшие отдаленные результаты, чем пациенты, которые получили менее 80% курсовой терапии (стойкий вирусологический ответ в 56% случаев по сравнению с 36% — по данным исследования CI98/580).

Лечение рецидивов: 345 пациентов получали в ходе исследований Интрон А в виде монотерапии или в комбинации с рибавирином по поводу рецидива. У этой группы больных добавление рибавирина к Интрону А вызывало 10-кратное увеличение эффективности лечения по сравнению с монотерапией Интроном А (48.6% и 4.7%), что проявлялось элиминацией РНК HCV из сыворотки крови (менее 100 копий/мл при проведении ПЦР-реакции), уменьшением воспаления печени и нормализацией АЛТ. Причем эти результаты сохранялись через 6 месяцев после окончания терапии (стойкий вирусологический ответ).

У пациентов, получавших Интрон А в ходе проведения контролируемых клинических исследований, определяли интерферон-нейтрализующие антитела. Частота выявления этих антител составляла 2.9% у больных, получавших терапию Интроном А по поводу онкологического заболевания, и 6.2% у пациентов с хроническим гепатитом. Титры антител были низкими практически во всех случаях, а их выявление не связывалось со снижением эффективности терапии или с другими аутоиммунными нарушениями. У пациентов с гепатитом отсутствие снижения эффективности терапии связано, вероятно, с низким титром антител.

Доклинические данные по безопасности препарата

Несмотря на то, что интерферон считается видоспецифичным веществом, были проведены исследования его токсичности у животных.

Введение человеческого рекомбинантного интерферона альфа-2b в течение 3 месяцев не сопровождалось признаками токсичности у мышей, крыс, кроликов. Введение препарата обезьянам вида Cynomolgus в течение 3 мес. ежедневно в дозе 20×106 МЕ/кг/сут. также не привело к появлению заметных признаков токсичности. Токсическое действие наблюдалось у обезьян при введении в дозе 100×10 МЕ/кг/сут. в течение 3 мес.

При проведении соответствующих исследований не установлено мутагенного действия интерферона альфа-2b.

В исследованиях с применением интерферона у нечеловекообразных приматов наблюдались нарушения менструального цикла.

Результаты исследований влияния интерферона альфа-2b на репродуктивность у животных указывают на отсутствие тератогенного эффекта у крыс и кроликов. Препарат, также, не оказал влияния на течение беременности, развитие плода и на репродуктивную функцию у потомства леченых крыс.

В исследованиях, проведенных на макаках резус, показано, что применение высоких доз интерферона альфа-2b в высоких дозах (превышающих рекомендуемые в 90 и 180 раз) вызывает аборты. Известно, что и другие интерфероны альфа и бета при применении в высоких дозах вызывают ановуляцию и аборты у макак резус (эти эффекты дозозависимы).